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酶標(biāo)儀原理
  • 發(fā)布日期:2018-07-10      瀏覽次數(shù):5244
    • 酶標(biāo)儀:即酶聯(lián)免疫檢測儀(ELISA Reader)是酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的儀器??珊唵蔚胤譃榘胱詣?dòng)和全自動(dòng)2大類,但其工作原理基本上都是一致的,其核心都是一個(gè)比色計(jì),即用比色法來分析抗原或抗體的含量。ELISA測定一般要求測試液的終體積在250ul以下,用一般光電比色計(jì)無法完成測試,因此對酶標(biāo)儀中的光電比色計(jì)有特殊要求。

      酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)方法

      酶標(biāo)朕免疫吸附試驗(yàn)方法簡稱酶標(biāo)法,是標(biāo)記技術(shù)中的一種,是從熒光抗體技術(shù),同位素免疫技術(shù)發(fā)展而來的一種敏感,特異,快速并且能自動(dòng)化的現(xiàn)代技術(shù)。

      酶標(biāo)法的基本原理是將抗原或抗體與酶用膠聯(lián)劑結(jié)合為酶標(biāo)抗原或抗體,此酶標(biāo)抗原或抗體可與固相載體上或組織內(nèi)相應(yīng)抗原或抗體發(fā)生特異反應(yīng),并牢固地結(jié)合形成仍保持活性的免疫復(fù)合物。當(dāng)加入相應(yīng)底物時(shí),底物被酶催化而呈現(xiàn)出相應(yīng)反應(yīng)顏色。顏色深淺與相應(yīng)抗原或抗體含量成正比。

      由于此技術(shù)是建立在抗原-抗體反應(yīng)和酶的催化作用的基礎(chǔ)上,因此,具有高度的靈敏性和特異性,是一種極富生命力的免疫學(xué)試驗(yàn)技術(shù)。

      酶標(biāo)儀的工作原理及結(jié)構(gòu)

      酶標(biāo)儀實(shí)際上就是一臺(tái)變相的光電比色計(jì)或分光光度計(jì),其基本工作原理與主要結(jié)構(gòu)和光電比色計(jì)基本相同。

      光源燈發(fā)出的光波經(jīng)過濾光片或單色器變成一束單色光,進(jìn)入塑料微孔極中的待測標(biāo)本。該單色光一部分被標(biāo)本吸收,另一部分則透過標(biāo)本照射到光電檢測器上,光電檢測器將這一待測標(biāo)本不同而強(qiáng)弱不同的光信號(hào)轉(zhuǎn)換成相應(yīng)的電信號(hào)。電信號(hào)經(jīng)前置放大,對數(shù)放大,模數(shù)轉(zhuǎn)換等信號(hào)處理后送入微處理器進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和計(jì)算,后由顯示器和打印機(jī)顯示結(jié)果。

      微處理機(jī)還通過控制電路控制機(jī)械驅(qū)動(dòng)機(jī)構(gòu)X方向和Y方向的運(yùn)動(dòng)來移動(dòng)微孔板,從而實(shí)現(xiàn)自動(dòng)進(jìn)樣檢測過程。而另一些酶標(biāo)儀則是采用手工移動(dòng)微孔板進(jìn)行檢測,因此省去了X,Y方向的機(jī)械驅(qū)動(dòng)機(jī)構(gòu)和控制電路,從而使儀器更小巧,結(jié)構(gòu)也更簡單。

      微孔板是一種經(jīng)事先包理于放置待測樣本的透明塑料板,板上有多排大小均勻一致的小孔,孔內(nèi)都包埋著相應(yīng)的抗原或抗體,微孔板上每個(gè)小孔可盛放零點(diǎn)幾毫升的溶液。其常見規(guī)格有40孔板,55孔板,96孔板等多種,不同的儀器選用不同規(guī)格的孔板,對其可進(jìn)行一孔一孔地檢測或一排一排地檢測。

      酶標(biāo)儀所用的單色光既可通過相干濾光片來獲得,也可用分光光度計(jì)相同的單色器來得到。在使用濾光片作濾波裝置時(shí)與普通比色計(jì)一樣,濾光片即可放在微孔板的前面,也可放在微孔板的后面,其效果是相同的。光源燈發(fā)出的光經(jīng)聚光鏡,光欄后到達(dá)反射鏡,經(jīng)反射鏡作90o反射后垂直通過比色溶液,然后再經(jīng)濾光片送到光電管。

      酶標(biāo)儀和普通的光電比色計(jì)有以下幾點(diǎn)差異:

      (l)盛裝待測比色液的容器不再使用比色皿,而是使用塑料微孔板。微孔板常用透明的聚乙烯材料制成,對抗原抗體有較強(qiáng)的吸附作用,故用它作為固相載體。

      (2)由于盛樣本的塑料微孔板是多排多孔的,光線只能垂直穿過,因此酶標(biāo)儀的光來都是垂直通過待測溶液和微孔板的,光束既可是從上到下,也可以是從下到上穿過比色液。

      (3)酶標(biāo)儀通常不僅用A,有時(shí)也使用光密度OD來表示吸光度。

      酶標(biāo)儀可分為單通道和多通道2種類型,單通道又有自動(dòng)和手動(dòng)2種之分。自動(dòng)型的儀器有X,Y方向的機(jī)械驅(qū)動(dòng)機(jī)構(gòu),可將微孔板L的小孔一個(gè)個(gè)依次送入光束下面測試,手動(dòng)型則靠手工移動(dòng)微孔板來進(jìn)行測量。

      在單通道酶標(biāo)儀的基礎(chǔ)上又發(fā)展了多通道酶標(biāo)僅,此類酶標(biāo)僅一般都是自動(dòng)化型的。它設(shè)有多個(gè)光束和多個(gè)光電檢測器,如12個(gè)通道的儀器設(shè)有12條光束或12個(gè)光,12個(gè)檢測器和12個(gè)放大器,在X方向的機(jī)械驅(qū)動(dòng)裝置的作用下,樣品12個(gè)為一排被檢測。多通道酶標(biāo)儀的檢測速度快,但其結(jié)構(gòu)較復(fù)雜價(jià)格也較高。

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